Random Amplified Polymorphic DNA Genotyping에 의한 항결핵제 내성 결핵균의 분자 역학적 특성

Abstract

Background : In spite of appropriate therapy and control for tuberculosis, the prevalence of tuberculosis is still frequent in Korea. Emerging infection and rapid detection of multidrug-resistant Mycobacterium tuberculosis (MDR-TB) are major interests in microbiologic laboratories. In this study, we evaluated the usefulness of random amplified polymorphic DNA (RAPD) genotyping for molecular epidemiological characteristics of MDR-TB. Methods : We analyzed 64 clinical strains of M. tuberculosis including 35 strains which showed resistance to one or more antimycobacterial drugs and M. tuberculosis H37Rv (ATCC 27294), as a drug-sensitive control strain. RAPD genotyping analysis was carried out under eight reaction conditions and using ten random primers (A-1245, AP-50, B-1245, DKU-44, DKU-49, Leg-1, INS-2, IS- 986-FP, PF-15 and MBR). Results : RAPD patterns using six primers (IS-986-FP, DKU-44, DKU-49, INS-2, B-1245, and AP- 50) showed marked polymorphisms that were easier to discriminate than those with other primers. RAPD patterns represented various polymorphisms among 64 strains. However, RAPD could not discriminate MDR-TB strains from drug-sensitive ones. Conclusions : RAPD genotyping is assumed a preferable technique for discrimination among clinical strains of M. tuberculosis but not for specifying MDR-TB strains.

배경 : 결핵은 적절한 치료법의 발전과 예방대책의 수립에도 불구하고 아직도 국내에서는 유병률이 높은 편이며, 유전자변이 에 의한 항결핵제 내성 결핵균의 출현과 다약제 내성 결핵균에 의한 감염으로 이에 대한 신속한 검출에 관심이 고조되고 있다. 이 연구에서는 항결핵제 감수성결과상 다약제 내성이 확인된 결 핵균을 대상으로 RAPD 분석법을 실시하여 분자역학적 특성을 알아보고자 하였다. 방법 : 임상검체에서 분리된 M. tuberculosis 총 64주를 대상 으로 하였고 약제 감수성 표준 균주로는 M. tuberculosis H38Rv (ATCC 27294)를 사용하였다. 약제 감수성 결과상 한가지 이상 에 내성을 보이는 35주를 대상으로 약제 감수성 유형에 따른 RAPD 유전자형 분석은 10종의 random 시발체(AP-50, RP- 15, MBR, DKU-44, DKU-49, A-1245, B-1245, Leg-1, IS- 986-FP 및 INS-2)를 이용한 8개의 조건에서 실시하였다. 결과 : 총 8가지 조건에서 IS-986-FP, INS-2, DKU-44와 DKU-49, B-1245 및 AP-50의 6종의 시발체를 사용였을 때 다 형성의 분석이 훨씬 용이하였다. 결핵균 64중의 RAPD 양상은 다형성이 다양하게 분석되었다. RAPD 양상에 의해 항결핵제 감 수성과 내성 균주간의 구별은 할 수 없었다.결론 : RAPD를 이용한 유전자형 분석은 결핵균 형별 분석에 는 유용하나 약제 내성유형과 유전자형 간에 연관성을 찾는데는 적절하지 못하였다.