뇌척수액에서 중합효소 연쇄반응을 이용한 Candida albicans DNA의 검색

Abstract

The importance of systemic candidiasis has been discussed in patients with predisposing factors such as immunosuppressive therapy, prolonged use of antibiotics and catheter. Some clinicians have reported that the incidence of systemic candidiasis, especially Candids meningitis is increasing and the importance of early diagnosis has been emphasized. In this study, polymerase chain reaction(PCR) was used to amplify a Candida albicans DNA in the various clinical specimens-cerebrospinal fluid(CSF), urine and skin tissues. In agarose gel and Southern blot analysis of PCR-amplified products, amplification of the 273-bp fragment was showed. The use of primers selected from the gene encoding the secretory aspartate proteinase of C. albicans resulted in the specific amplification of C. albicans DNA. The sensitivity of the PCR was determind by 10-fold dilution method. The specificity of this experiment was determined by reaction with various samples-T. rubrum, M. cams, Aspergillus fumigatus, and human genomic DNA. This study suggested that the PCR method should be much sensitive and very useful for making a rapid diagnosis and allowing an early to treatment of candida infection.

PCR을 이용하여 나균 DNA를 동정하기 위하여 칸디다성 뇌막염으로 의심되는 환자의 뇌 척수액 및 뇨와 피부조직 등의 가검물을 대상으로 PCR을 실시하여 다음과 같은 결과를 얻 었다. 각 검체의 DNA를 분리하여 PCR을 시행하고 전기 영동 및 Southern blot hybridization 분석을 한 결과, 표피 칸디다증으로 진단된 환자 1예의 파라핀 포매 조직과 Stevens-Johnson 증후군, 불명 열 환자 각각 1예의 소변에서는 273bp의 칸디다균 DNA를 검출하였다. 뇌막염 환자 2예와 이의정상 대조군 1예의 뇌척수액에서는 PCR시행 후 전기영 동상에서 칸디다균 DNA를 검출하지 못했으나 Southern blot hybridization한 결과, 뇌막염 환자 2예의 뇌척수액에서273bp의 칸디다균 DNA가 검출되어 Southern blot hybridization이 더욱 민감함을 알 수 있었다. PCR반응의 민감도를 측정하기 위하여 칸디다균 혼탁액 5ng을 취하여 10배 희석법으로 연속 희석하여 PCR을 시행하였으며 동시에 동량의 균주를 sabouraud dextrose agar 배지 에 plate하여 배양된 집락 수를 관찰하였다. 그 결과전기 영동 분석에서는 50 pg(100 cells) 까지 Southern blot 분석에서는 0.5 pg(2 cells)까지 검출이 가능하여 Southern blot분석이 예민도가 더 높음을 알 수 있었다. 본 PCR실험의 특이도 검사를 위해 C. albicans, T. rubrum M. canis, Aspergillus fumigatus, human genomic DNA를 사용하여 PCR을 시행하고 전기 영동 및 Southern bolt hybridization 한 결과 Candida albicans만이 273bp의 target DNA band가 검출되어 본 검사 법의 특이도가 매우 높음을 알 수 있었다. 이상과 같이 Candida albicans에 대한 PCR 검사법은 민감도와 특이도가 매우 높고 빠른 시간내에 글을 증명함으로써 칸디다증의 진단에 하나의 새로운 방법으로 널리 활용될 수 있 을 것으로 사료된다.