만성 간염환자 혈청에서 B 형 간염 바이러스 Precore / Core 영역 DNA 의 돌연변이

Abstract

Objective : Ca us es of div e rs e c linic a l s our s e s of pa tient s w ith ch ron ic hepa tit is B v ir us (HBV) in fe c tion a r e not fully - know n. T h e hos t imm une re s pons e to HBV an tig en an d the appe a r a nc e of mu ta nt v ir us es a re be liev ed to be im por ta nt fa c tor s . T o de t ermine w h ethe r a ppea r an c e of pre cor e an d cor e m ut an t v iru s e s a r e r e la t ed to th e clin ica l cour s e of the pa tient s , w e a na ly s ed th e entire core region of vira l DNA in 7 HBV chronic c a r r ier s . Me tho ds : S er um w a s obt a ined from 7 pa t ien ts (3 ch ron ic a c tiv e hepa tit is , 4 CAH w ith c ir rh os is )a n d pr e- C an d cor e r eg ion of HBV w er e amplified b y polymer a s e ch a in r ea ct ion, then dir ec tly s equen ced. Re s ult : In a ll 7 HBV DNA th er e w a s a point mut a t ion fr om T to C a t nu cleotide 2104 of cor e r eg ion, an d ea ch DNA a ls o cont a in ed 6 to 17 v a r iable point mut a t ions a t differ en t n uc leotide s y ielding v a r ious amino a c id s u bs t itut ion . On e of DNA ha d a poin t m ut a t ion fr om A to G a t n uc leot ide 1898, con v er t ing tr y ptoph an (T GG) to a s top codon(T AG). T w o c a s e s of de let ion m uta t ion s cov e red C- r eg ion s egment r an g in g from n uc leot ide 2142 to 2306 a nd on e c a s e of de let ion cov er ed pre - C r eg ion ra ng ing from nu cleot ide 1815 to 1843. Conc lus ion : T hr ee out of s ev en DNA con ta ined mut a tiona l s it es coin cided w ith know n imm unodomin an t T ce ll epitope s an d r es t of the mut a tion a l s it es could a ls o a ffec t the an t ig enec ity of the HBV. T her efor e, mut a nt HBV cou ld a fte r the h os t imm un e re s pons e, an d m ay modula te the c lin ica l cou rs e of in fe c tion. Ke y Words : Chr onic Hepa tit is B, HBV pr e cor e/ core DNA mu ta tion

목 적 : 만성간염환자의 HBV precore 및 cor e 유전자 에 많은 변이가 축적되어 있으며 이들의 일부는 바이러 스의 항원성의 변화와 직결되어져 있어, 이러한 변이주의 출현을 추적하는 일은 이 병의 진행을 예측하는 주요지 표가 될 수 있으리라 생각된다. 이에 저자등은 HBV core DNA의 유전자 서열을 조사하여 만성 B형 간염에서 이 유전자의 변이 유무와 정도를 조사한 후 변이주가 만성 간질환의 진행에 어떠한 영향을 미치는지 알아보고자 하 였다. 대상 및 방법 : 7명의 만성 B형 간염환자에서 혈청을 채취한 뒤 NaOH법으로 소화시키고 PCR법으로 HBV cor e DNA를 증폭시켰다. HBV cor e DNA를 pcDNA3 pla smid에 clonin g 시킨후 r ecomb in a n t pla smid를 대량분 리하여 s equ encin g 에 이용하였다. DNA s equ en cin g 은 S an g er의 dideox y n u cleotide cha in t ermin at ion 법을 사용 하였으며 규명된 염기서열은 DNAs is pr og r am (Hita chi Co.)을 이용하여 비교분석하였다. 각 HBV cor e항원의 아 미노산 서열을 Pr os is pr og r am (Hita chi Co.)을 이용하여 비교분석하였다. 결 과 : 7명중 5명에서는 예상크기의 HBV core DNA ba n d를 관찰할 수 있었으나 2명의 환자에서 정상보다 157bp 및 122bp가 짧은 DNA ba n d를 관찰하였고, 1명의 환자에서는 precore 영역의 개시코돈의 치환으로 이 부 위의 생성이 불확실한 변이주 및 open r ea din g frame의 중간에 정지코돈이 나타나 n on s en s e mu ta t ion 을 일으킨 변이주 등이 검출되었으며, 대다수 환자에서 mis s en s e mu ta tion 을 관찰 할 수 있었다. 결 론 : 이러한 결과는 만성 B형 간염환자에서 HBV cor e 항원영역을 지령하는 유전자에 많은 변이가 축적되 어 있으며 이 변이는 HBV core 항원의 항원성을 변화시 키는 주 원인이 될 것으로 생각한다. 또한 만성 B형간염 의 발생에 있어서 돌연변이 HBV cor e 항원을 가진 HBV 의 역할을 이해하고 더 나아가 만성간염의 예방 및 치료 를 위한 HBV cor e DNA 백신을 디자인하는데 유용하게 쓰일 것으로 사료된다.