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신경모세포종에서 반정량적 중합효소연쇄반응을 이용한 N-myc 유전자 증폭의 검출 및 임상적 의의

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Author(s)
송영택양우익Hwang Min KimChang Hoon LeeChuhl Joo LyuSong Hee ParkKir-Young KimMoon Kyu KimHyun Sang ChoKwang Chul LeeYoung Tak LimSeok Won ParkHeung Sik KimChin Moo KangIm Ju KangSeung Hoon ChoiYoung Taek SongWoo Ick Yang김황민이창훈유철주박송희김길영김문규조현상이광철임영탁박석원김흥식강진무강임주최승훈
Keimyung Author(s)
Kim, Heung SikKang, Chin Moo
Department
Dept. of Pediatrics (소아청소년학)
Journal Title
대한소아혈액종양학회지
Issued Date
2001
Volume
8
Issue
1
Abstract
Purpose: The N-myc amplification is one of well known poor prognostic markers in neurblastoma. Because the traditional detection method, Southern blot, is expensive, labor-intensive and time-consuming, the detection of N-myc amplification is not routinely performed in Korea. The purposes of this study are to develop polymerase chain reaction (PCR) for detecting N-myc amplification in neuroblastoma tumor tissue, and to elucidate the clinical significance of N-myc amplification.
Methods: The clinical data and paraffin embedded tumor specimen of 54 neuroblastoma cases were collected from 10 medical centers in Korea. We have developed semiquantitative method of estimating gene copy number that uses differential PCR. N-myc gene primers (RC N-myc, N-myc 7-1) are amplified together with primers from a single-copy internal control gene (beta-globin). After ethidium bromide-stained agarose gel electrophoresis, the ratio of the two PCR products, which stands for N-myc amplification, is determined. Kaplan-Meier survival analysis was performed to evaluate the prognostic significance of N-myc amplification.
Results: The differential PCR was very effective, less expensive, less labor-intensive, and simple detection method for N-myc amplification. The percentage of N-myc amplification was higher in the patients older than 1 year old (34.1%: 14/41), when they were compared to the patients younger than 1 year old (16.7%: 2/12). The percentage of N-myc amplification was higher in the patients who have primary tumor at adrenal gland (40.9%: 9/22) than who have primary tumor at retroperitoneum (17.6%: 3/17) or at mediastinum (16.7%: 2/12). In Stage I, II, and III patients, the mean survival time of N-myc amplified group was 18 months and that of N-myc umamplified group was 64 months (Log Rank 4.35, P=0.037).
Conclusion: The differential PCR was very effective, less expensive, less labor-intensive, and simple detection method for N-myc amplification. The N-myc amplification is one of poor prognostic indicators in Neuroblastoma.
목적; 본 연구의 목적은 첫째, 중합효소연쇄반응을 이용하여 N-myc 유전자의 증폭을 검출하는 방법을 개발하고, 둘째, 이를 이용하여 신경모세포종에서 N-myc 유전자 증폭의 임상적 의의를 알아보기 위함이다.
방법: 1984년부터 1999년까지 전국 10개 대학병원에서 경험하였던 54례의 신경모세포종 환자에서 적출한 신경모세포종 조직의 paraffin embedded 검체에서 추출한 DNA를 사용하였다. N-myc 7-1 시발체를, internal standard인 β-globin 유전자는 GH20과 PC04 시발체를 이용하여 중합효소연쇄반응을 실시하여, agarose gel에서 전기영동하여 N-myc 유전자의 증폭정도를 측정하여 그 임상적 의의를 분석하였다.
결과: 중합효소연쇄반응은 신경모세포종 조직에서 N-myc 유전자 증폭을 측정할 수 있는 매우 유용한 방법이었다. 1세 이전의 환자 12명 중 2명에서 N-myc 유전자 증폭이 있었던 반면(16.7%), 1세 이상의 환자 41명 중 14명에서 N-myc 유전자가 증폭된 경우가 흔하였다(P<0.05). 부신에서 원발하였던 22레 중 9레에서 N-myc 유전자 증폭이 있어(40.9%), 17.6% (3/17)의 N-myc 유전자 증폭을 보였던 후복막강이나 16.7% (2/12)의 N-myc 유전자 증폭을 보였던 종격동에 비하여 높은 양성률을 보였다(P<0.005). 제 1, 2, 3 임상병기에서 26.7% (8/30)에서 N-myc 유전자의 증폭이 있었던 반면 제 4 병기의 경우 33.3% (8/24)에서 N-myc 유전자의 증폭이 있었다. N-myc 유전자 증폭이 없었던 환자에서 26.97±18.26개월간 추적이 가능했고, N-myc 유전자 증폭이 있었던 경우 12.38±8.58개월간 추적이 가능했다(P<0.05).
30례의 제 1, 2, 3 병기 환자 중 22례는 N-myc 유전자 중폭이 없었으며, 8레는 N-myc 유전자의 증폭이 있었는데, N-myc 유전자 증폭이 없었던 군의 평균 생존기간은 64개월이었고, N-myc 유전자 증폭이 있었던 군의 평균 생존기간은 18개월이었다(Log Rank 4.35, P=0.037).
결론: 중합효소 연쇄반응은 신경모세포종에서 N-myc 유전자 증폭을 검출하는 매우 효과적인 방법이었으며, N-myc 유전자 증폭은 신경모세포종에서 불량한 예후인자임을 알 수 있었다.
Alternative Title
Detection of N-myc Amplification with Differential PCR in Neuroblastoma and It's Clinical Significance
Keimyung Author(s)(Kor)
김흥식
강진무
Publisher
School of Medicine
Citation
송영택 et al. (2001). 신경모세포종에서 반정량적 중합효소연쇄반응을 이용한 N-myc 유전자 증폭의 검출 및 임상적 의의. 대한소아혈액종양학회지, 8(1), 42–50.
Type
Article
ISSN
1225-6978
URI
https://kumel.medlib.dsmc.or.kr/handle/2015.oak/39162
Appears in Collections:
1. School of Medicine (의과대학) > Dept. of Pediatrics (소아청소년학)
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